広大な銀河で出会う、魅力あふれるキャラクターたち。異星人との種族を越えた恋愛も!?

全銀河の未来を背負う主人公

ジョン シェパード（種族：人類）

　連合軍少佐で本作の主人公。これまでの経歴を買われ、絶滅した異星人・プロセアンが残した“ビーコン”の回収任務に抜擢される。サレンの陰謀を暴こうとしている。（容姿、性別、生立ち、経歴、性格、言動はプレイヤーが選択可能）

機械生命体を率いるアンチヒーロー

サレン アルテリウス（種族：トゥーリアン）

「この戦いの真の理由を、お前は理解できないだろう」

　“ビーコン”奪取のため、機械生命体・ゲスを率いて、人類が最初に入植した惑星・エデンプライムを襲撃した裏切者。彼の陰謀により、全銀河は重大な危機に瀕することに。

シェパードをサポートする美しい女性兵士

アシュリー ウイリアムス（種族：人類）

「敵を仕留めるばかりの女には、感性なんてないとでも思ってた？」

　エデンプライムに赴任中の連合軍兵士。ゲスとの交戦中、シェパードに命を救われる。銃の腕前では右に出る者がいない。気が強く、堂々とした美しい女性。

ナイラス クリィク（種族：トゥーリアン）

　シタデル評議会の特命任務を遂行する、特務査察局・スペクターの1人。シェパードの艦に乗艦し任務に同行するが、本当の目的は別にある。

ケイダン アレンコ（種族：人類）

　シェパードの艦で任務に就く連合軍兵士。特殊能力・バイオティクスの使い手。ビーコン回収任務でシェパードと同行する。バイオティクスであるがゆえの苦悩を背負っている。

リアラ（種族：アサリ）

　プロセアンの研究で名高いアサリの考古学者。その専門知識ゆえにサレンに狙われる。研究に人生を捧げてきたためウブでおっとりしているが、実は強力なバイオティクスの使い手。

タリ（種族：クォリアン）

　サレンの裏切りの証拠を握る若きクォリアン女性。彼女の行方がサレン告発の重要な鍵をとなる。現在は種族の船団を離れて“成人の儀式”の旅に出ている。